藥品檢測(cè)中的內(nèi)毒素的檢測(cè)方法及意義

發(fā)布時(shí)間： 2024-04-17

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什么是內(nèi)毒素？

細(xì)菌內(nèi)毒素，又稱為“熱原”，細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的特有結(jié)構(gòu)，細(xì)菌在存活狀態(tài)時(shí)不釋放出來，只有當(dāng)細(xì)菌死亡自溶時(shí)才釋放到細(xì)胞外，表現(xiàn)多種毒性作用，為區(qū)別于外毒素而稱之為內(nèi)毒素。細(xì)菌內(nèi)毒素是由脂多糖（LPS）、蛋白質(zhì)和磷脂組成的高分子量復(fù)合物，發(fā)揮毒性的成分主要為類脂質(zhì)A（Lipid A），類脂A是LPS活性不可缺少的部分, 可視作LPS 的“生物活性中心”。內(nèi)毒素位于細(xì)胞壁的最外層、覆蓋于細(xì)胞壁的黏肽上。各種細(xì)菌的內(nèi)毒素的毒性作用較弱，大致相同，可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。內(nèi)毒素耐熱而穩(wěn)定，抗原性弱?？纱碳C(jī)體產(chǎn)生抗體，但無中和作用，形成抗毒素，經(jīng)甲醛處理不能成為類毒素。

內(nèi)毒素的檢測(cè)方法有哪些？

20世紀(jì)60年代，人們發(fā)現(xiàn)一種古老的海洋生物，被稱為“海洋活化石”的鱟，它的血液與內(nèi)毒素接觸后會(huì)發(fā)生特異性的凝集反應(yīng)，人們經(jīng)過大量研究和實(shí)驗(yàn)從它的血液中提取出了用于檢測(cè)內(nèi)毒素的“鱟試劑”。內(nèi)毒素檢測(cè)單位為EU/ml。

目前內(nèi)毒素測(cè)定方法有：

①凝膠法，將樣本與鱟試劑在試管中混合，并使用干浴器，在37±1°C下，孵育60±2min，期間不要振動(dòng)。加熱完成后，立即緩慢地將試管傾斜180°。如果凝膠已形成并能保持其完整性而不變形或塌陷，則結(jié)果可確定為陽性，而如果未形成凝膠則為陰性。在檢測(cè)期間，對(duì)于一系列樣本，要進(jìn)行多倍稀釋（通常為2倍），以檢查每個(gè)樣品的結(jié)果是否為陽性。確定為陽性的最大有效稀釋倍數(shù)或最小濃度被稱為終點(diǎn)。

②?脂多糖（LPS）的生物學(xué)標(biāo)記的探測(cè)分析法，雖然此類方法能夠檢測(cè)出樣品中LPS的種類并且能敏感地檢測(cè)出樣品中LPS的濃度，但是仍然不能準(zhǔn)確地檢測(cè)出有生物學(xué)作用的內(nèi)毒素濃度。

③?酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），ELISA法是目前新興的內(nèi)毒素檢測(cè)方法, 它是基于抗原抗體的酶聯(lián)免疫測(cè)定法，由外加熱原質(zhì)刺激巨噬細(xì)胞后產(chǎn)生的內(nèi)熱原物質(zhì)如腫瘤壞死（TNF）因子白細(xì)胞介素1（IL-1）等而進(jìn)行測(cè)定的。

④?生物傳感器檢測(cè)法，生物傳感器也是目前新興的內(nèi)毒素檢測(cè)方法，大部分仍是基于鱟試驗(yàn)法中鱟阿米巴法溶解產(chǎn)物與內(nèi)毒素的LPS地凝結(jié)反應(yīng)。該類檢測(cè)法具有測(cè)量速度快、敏感性高、最低檢測(cè)限低等特點(diǎn)，目前，國內(nèi)外有較多對(duì)生物傳感器檢測(cè)內(nèi)毒素的研究。

內(nèi)毒素檢測(cè)的意義有哪些？

細(xì)菌內(nèi)毒素具有多種生物學(xué)活性，微量的內(nèi)毒素進(jìn)入機(jī)體將會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、血壓降低、寒顫、引起DIC、內(nèi)毒素?cái)⊙Y等一系列臨床反應(yīng)，因此內(nèi)毒素快速定量檢測(cè)，對(duì)臨床對(duì)癥治療具有很深的現(xiàn)實(shí)意義。

①內(nèi)毒素檢測(cè)不僅有助于鑒別是否為細(xì)菌感染，尤其是對(duì)于革蘭陰性桿菌感染具有重要的參考價(jià)值，還能提示感染嚴(yán)重程度，可用于發(fā)熱原因的快速輔助診斷。

②有利于臨床及早診治疾病，為選擇用藥提供一定理論依據(jù)，對(duì)病情進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)給藥后的療效及預(yù)后判斷具有重大意義。

③用于血液透析液的監(jiān)測(cè)，對(duì)于保證治療效果和患者安全有著重要作用。

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近期，國家認(rèn)監(jiān)委發(fā)布2024年第22號(hào)公告，決定廢止《同線同標(biāo)同質(zhì) 服務(wù)平臺(tái)運(yùn)行指南》等19項(xiàng)認(rèn)證認(rèn)可行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。其中，RB/T214-2017《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求》這一重要標(biāo)準(zhǔn)也赫然在列，標(biāo)志著曾經(jīng)的CMA資質(zhì)認(rèn)定的通用要求正式告別了歷史舞臺(tái)。公告詳情其實(shí)早在今年7月份，國家認(rèn)監(jiān)委就已經(jīng)發(fā)布過關(guān)于廢止國認(rèn)實(shí)〔2018〕28號(hào)文件的公告，為這一變化埋下了伏筆。面對(duì)這一重大更新，我司特此為大家解答幾個(gè)關(guān)鍵問題： ★舊標(biāo)準(zhǔn)RB/T214-2017將由哪個(gè)新標(biāo)準(zhǔn)替代？未來將采用GB/T 27025-2019（等同ISO/IEC 17025）來建立體系，該標(biāo)準(zhǔn)同樣具有權(quán)威性和指導(dǎo)意義。 ★新舊標(biāo)準(zhǔn)之間有何區(qū)別？對(duì)于新舊標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)別，大家可能有些困惑。但實(shí)際上，由于本次廢止并沒有直接推出對(duì)應(yīng)的新標(biāo)準(zhǔn)，所以我們只需重點(diǎn)關(guān)注GB/T 27025-2019這一新體系即可。它將在未來一段時(shí)間內(nèi)，成為我們檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的重要指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)。 ★新舊標(biāo)準(zhǔn)交替期間，需要注意哪些問題？在新舊標(biāo)準(zhǔn)交替期間，檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)需要注意以下問題： 1. 及時(shí)了解并熟悉新標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容和要求，確保機(jī)構(gòu)能夠按照新標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行運(yùn)作。 2. 對(duì)機(jī)構(gòu)現(xiàn)有的管理體系進(jìn)行修訂和完善，以確保其符合新標(biāo)準(zhǔn)的要求。 3. 對(duì)機(jī)構(gòu)的人員進(jìn)行培訓(xùn)和考核，以確保他們具備執(zhí)行新標(biāo)準(zhǔn)所需的知識(shí)和技能。 4. 按照新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)內(nèi)審員進(jìn)行培訓(xùn)，并按照新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)機(jī)構(gòu)管理體系實(shí)施內(nèi)部審核。 5. 與客戶、監(jiān)管機(jī)構(gòu)等相關(guān)方進(jìn)行溝通和協(xié)調(diào)，以確保他們了解并接受新標(biāo)準(zhǔn)的變化。 6. 密切關(guān)注國家認(rèn)監(jiān)委或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)化組織的后續(xù)公告和通知，以便及時(shí)了解新標(biāo)準(zhǔn)的最新動(dòng)態(tài)和要求。